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液相常見6種問題色譜峰解決方法

時(shí)間 : 2022-10-24 14:57:01 閱讀 : 280

一、拖尾峰

1. 篩板阻塞:柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞,樣品就會(huì)在篩板部分受阻而形成時(shí)間延遲,使得樣品在柱后流出時(shí)峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱,或者更換篩板。

2. 色譜柱塌陷:是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失,不能對(duì)物質(zhì)形成保留,使得物質(zhì)不在固定相上保留而隨流動(dòng)相流出,但是又還有一點(diǎn)柱效,因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱。

3. 有污染:即樣品不在同一起跑線起跑,從后面開始跑得到達(dá)終點(diǎn)稍晚,表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機(jī)溶劑梯度洗脫1h以上,以沖洗柱子。

4. 流動(dòng)相PH值選擇錯(cuò)誤:如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動(dòng)態(tài)平衡,離子型的陸續(xù)向分子型轉(zhuǎn)化就會(huì)表現(xiàn)出拖尾。調(diào)節(jié)PH值可抑制分子解離,改善拖尾,對(duì)于堿性化合物,相對(duì)較低的PH值更有利于得到對(duì)稱峰。


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二、前沿峰

1. 樣品過載:被保留的樣品在正常出峰時(shí)間前陸續(xù)出來,形成前沿峰。降低樣品含量。

2. 樣品溶劑選擇不恰當(dāng):當(dāng)樣品溶劑的洗脫能力大大強(qiáng)于流動(dòng)相時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰,例如,在反相色譜中用已腈做樣品溶劑,而流動(dòng)相的洗脫力較弱時(shí)會(huì)出現(xiàn)前沿峰。選擇流動(dòng)相或者接近流動(dòng)相的比例作為樣品溶劑。

3. 色譜柱損壞:色譜柱柱效損失,不能對(duì)物質(zhì)形成保留。更換色譜柱。

4. 在大峰前有小峰出現(xiàn),假象前沿峰,即大峰前包埋了沒有分開的小峰。調(diào)整流動(dòng)相洗脫梯度。


三、基線漂移

1. 柱溫波動(dòng):即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng),通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。使用柱溫箱,控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器。

2. 流動(dòng)相不均勻:流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。使用HPLC級(jí)的溶劑,流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣處理。

3. 流通池被污染或有氣體:用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。

4. 流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化:更改配比或流速,為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。

5. 樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì):以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。


四、出現(xiàn)寬峰

1. 色譜柱污染或失效,造成塔板數(shù)降低:更換同樣類型的色譜柱,如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰,則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。

2. 柱子與檢測器之間的管路太長或管路內(nèi)徑太大:更換內(nèi)徑較小的短管路。

3. 檢測器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大:減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池。


五、基線噪音

1. 在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣(尖銳峰):流動(dòng)相脫氣,沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣。

2. 漏液:檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換泵密封。

3. 流動(dòng)相混合不完全:用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑。

4. 溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱):使用柱溫箱,減少溫度差異或加上熱交換器。

5. 在同一條線上有其他電子設(shè)備(偶然噪聲):斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正。采用精密級(jí)穩(wěn)壓電源。


六、分離度不夠

1.流動(dòng)相梯度洗脫設(shè)置不合理:優(yōu)化梯度洗脫程序。

2.流動(dòng)相污染或變質(zhì)(引起保留時(shí)間變化):重新配置流動(dòng)相。

3. 保護(hù)柱或分析柱阻塞:去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析,如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱;如果分析柱阻塞,可進(jìn)行反沖;如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦颍蝗绻麊栴}仍然存在,進(jìn)口可能阻塞了,更換入口處的篩板或更換色譜柱。


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